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In einer Klinik in Florenz wacht der Symbologe Prof. Robert Langdon (Tom Hanks) mit einem Schädeltrauma auf, das erhebliche Gedächtnislücken hinterlassen hat. Er kann sich in der jüngsten Vergangenheit nur noch dunkel an einen Unfall erinnern, doch dann wird auf ihn noch am Krankenbett von einer Frau namens Vayentha (Ana Ularu) ein Mordversuch verübt. Gemeinsam mit der Ärztin Sienna Brooks (Felicity Jones) kann er vor dem Angriff fliehen, und Langdon versucht nun zu ergründen, warum er überhaupt nach Italien kam.

Einen ersten Hinweis gibt eine Phiole, die er in seiner Jackentasche findet: Sie enthält einen Mini-Projektor, die das Bild von Dantes Inferno abbildet, auf dem Robert einen Verweis auf den Palazzo Vecchio erkennt. Dort stellen sie fest, dass die Totenmaske von Dante Alighieri, dem Verfasser der "Göttlichen Komödie", entwendet wurde, die zur Lösung des Rätsels beitragen soll. Während Langdon weitere Spuren verfolgt, werden die beiden vom Team des hartnäckigen Agenten Christoph Bouchard (Omar Sy) verfolgt, von einer Drohne durch den Boboli-Garten gejagt und erfahren von einem erschütternden Geheimnis:

Der amerikanische Milliardär Zobrist (Ben Foster) will mittels Virus eine Seuche auslösen, um der Überbevölkerung entgegen zu wirken. Das will Elizabeth Sinskey verhindern, Leiterin der Weltgesundheitsorganisation WHO, die auf Langdons Hilfe setzt. So verschlägt es Robert nach Venedig zum Markusdom und schließlich nach Istanbul, wo sein Ziel das Grab des Dogen Enrico Dandolo ist. Doch während seiner gefährlichen Reise zweifelt er an der Loyalität seiner Verbündeten Sienna und erfährt, dass er offenbar eine Figur im undurchschaubaren Spiel von Harry Sims alias Provost (Irrfan Khan) ist, dessen mächtige Organisation sich in Zobrists Pläne verstrickt hat...