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Mitternacht: Gerade hat Jack Bauer (Kiefer Sutherland), Leiter der Anti-Terror-Einheit CTU in Los Angeles, noch mit seiner Tochter Kimberly (Elisha Cuthbert) Schach gespielt. Doch plötzlich hat das Familienidyll ein Ende: Kimberly ist verschwunden - durch das Fenster ihres Zimmers. Bevor Jack sich auf die Suche machen kann, ruft man ihn wegen eines Notfalls ins Büro; seine Frau Teri (Leslie Hope) muss allein nach ihrer Tochter suchen. Und es kommt noch schlimmer: Innerhalb der nächsten 24 Stunden wird ein Mordanschlag auf den Präsidentschaftskandidaten Senator David Palmer (Dennis Haysbert) befürchtet. Jack und sein Team setzen Himmel und Hölle in Bewegung, um die Drahtzieher des Attentats zu finden. Unterdessen sucht Teri weiter nach Kim, deren nächtlicher Ausflug sich unerwartet zu einem Kampf ums nackte Überleben entwickelt.

Achtzehn Monate sind vergangen, seit Jack Bauers Frau ermordet wurde. Seine Tochter Kimberly will nichts mehr von ihm wissen; von seiner Arbeit bei der CTU, der Anti-Terror-Einheit des CIA in Los Angeles, ist er beurlaubt. Bis er einen Anruf des US-Präsidenten höchstpersönlich erhält: Er soll zu einer geheimen Besprechung in sein altes Büro kommen. Der Grund: Terroristen planen einen Anschlag, bei dem innerhalb der nächsten 24 Stunden eine Atombombe in Los Angeles explodieren soll. Jack kann sich der CTU nicht länger verweigern. Er erklärt sich bereit, verdeckte Ermittlungen aufzunehmen, um die Attentäter aufzuspüren. Was er noch nicht weiß: Sie stecken mit der Person unter einer Decke, die vor anderthalb Jahren sein Leben zerstört hat...